产品内容【TAK-101】pTA2 Vector(50ng/μl) 10μl2×Ligation Buffer 50μlT4 DNA Ligase 10μl【TAK-201】pTA2 Vector(50ng/μl) 10μl2×Ligation Buffer 50μlT4 DNA Ligase 10μl10×A-attachment Mix 10μl
基本反应条件「TArget Clone」TM
灭菌蒸馏水(3-X)μl
2×Ligation Buffer 5μl
pTA2 Vector (50ng/μl) 1μl
PCR产物Xμl
T4 DNA Ligase 1μl
Total Volume 10μl
室温(15～25℃)、30min.
「TArget CloneTM -Plus-」
KOD酶扩增的PCR产物 9μl
10×A-attachment Mix 1μl
Total Volume 10μl
60℃、10min.
↓
灭菌蒸馏水(3-X)μl
2×Ligation Buffer 5μl
pTA2 Vector (50ng/μl) 1μl
上述处理后的PCR产物Xμl
T4 DNA Ligase 1μl
Total Volume 10μl
室温(15～25℃)、30min.
几点建议●使用纯化后PCR产物时A-attachment Mix的使用方法
如PCR反应后产生杂带，则需对PCR产物纯化后再使用。纯化后，再添加A-attachment Mix、dNTP、Mg、PCR Buffer和1×浓度的PCR Buffer后再进行反应。